La sobreexpresión del miR-145 produce la inhibición de la proliferación, migración e invasión y la disminución de las proteínas c-Myc, COX-2 y VEGF en una línea celular de cáncer ovárico epitelial

Resumen

El cáncer ovárico epitelial (COE) se mantiene como una de las principales causas de muerte por canceres ginecológicos a nivel mundial, debido a sus síntomas no específicos y resistente a las terapias actuales. El COE se caracteriza por su alta capacidad proliferativa y angiogénica. Esto se explica por estímulos paracrinos y autocrinos de factores de crecimiento como el factor de crecimiento nervioso NGF y el factor de crecimiento endotelio vascular VEGF. Los niveles de NGF y su receptor de alta afinidad (TRKA) se encuentran aumentados en COE. El aumento de NGF y la activación de TRKA de han relacionado con el incremento de niveles de proteínas pro-tumorales como el factor transcripcional c-Myc, la ciclooxigenasa-2 COX-2 y VEGF. La alta expresión de estas proteínas inducidas por NGF se relaciona con procesos importantes en el desarrollo y progresión del cáncer como la proliferación, angiogénesis, apoptosis y migración e invasión celular. El mecanismo por el cual NGF podría estar actuando seria a través de la regulación de la expresión de miRNAs, como miR-145, los cuales regulan la expresión de proteínas a nivel post-transcripcional al unirse a sus mRNAs blanco. Los miRNAs juegan roles importantes en múltiples procesos biológicos como: la proliferación, metabolismo, vasculogénesis, apoptosis, migración e invasión, diferenciación celular, entro otros. En COE, los niveles de miR-145 disminuyen con la progresión del COE, observándose un aumento de NGF en forma paralela. Además, los niveles de miR-145 se encuentran disminuidos en líneas celulares de COE en comparación con una línea celular no tumoral. Se ha reportado que una sobreexpresión de miR-145 inhibe la proliferación, migración e invasión celular, además de promover la apoptosis en líneas celulares de melanoma, cáncer de pulmón y próstata. Adicionalmente, proteínas involucradas con estos procesos celulares y que tienen sus valores aumentados en COE, como c-Myc, COX-2 y VEGF son blancos moleculares de miR-145. Hipótesis: La sobreexpresión de miR-145 disminuye la proliferación, migración, invasión en una línea celular de cáncer ovárico epitelial Objetivo: Determinar si el aumento en los niveles de miR-145 disminuye la proliferación, migración e invasión a través de c-Myc, COX-2 y VEGF en la línea celular A2780 de cáncer ovárico epitelial Metodología: La línea celular de COE A2780 y la línea celular no tumoral HOSE fueron transfectadas con 30nM de miR-145 por 48 horas utilizando lipofectamina. Los niveles de c-Myc y COX-2 fueron semi cuantificados por Inmunocitoquímica (ICQ) y Westernblot (WB). Los niveles de VEGF secretados al medio de cultivo fueron cuantificados por ELISA. La proliferación celular fue medida por ensayo de MTS e ICQ de Ki67. La migración e invasión de células A2780 fueron medidas en cámaras Transwell con y sin membrana de matrigel respectivamente. Resultados: La sobreexpresión de miR-145 disminuye significativamente los niveles de c-Myc en las líneas celulares A2780 (p<0,001 ICQ; p<0,05 WB) y HOSE (p<0,01 ICQ). Por otro lado, no se encontraron diferencias significativas en los niveles de COX-2 en ambas líneas celulares. Además, los niveles de VEGF disminuye significativamente (p<0,05) en los medios de cultivo de la línea celular A2780 y no en línea HOSE. En el ensayo de MTS se obtuvo una disminución significativa (p<0,05) cuando las células A2780 fueron transfectadas con miR-145. Además, los niveles de Ki67 disminuyen (p<0,001) en células A2780 transfectadas con miR-145. Finalmente, el número de células A2780 con capacidad migratoria e invasiva disminuye significativamente (p<0,01) en células transfectadas con miR-145 Conclusión: Estos resultados sugieren que la sobreexpresión de miR-145 disminuye los niveles proteicos de c-Myc y los niveles de VEGF en medios de cultivo, así como la proliferación, migración e invasión en la línea celular de COE (A2780)