Interacción de los glicosaminoglicanos con las isoformas de PDGF-A y -B, La. Su importancia funcional en la proliferación y migración de las células musculares lisas

Resumen

El PDGF (factor de crecimiento derivado de plaquetas) es un factor de crecimiento que activa la proliferacion y migracion de las celulas musculares lisas y que por consiguiente, presenta importancia fundamental en el desarrollo de la aterosclerosis. El PDGF de cadena A y de cadena B presentan distintas isoformas de cadena larga o corta que se diferencian segun la presencia o ausencia de la secuencia codificada por el exon 6 de union a glicosaminoglicanos. Los glicosaminoglicanos son componentes glucidicos de los proteoglicanos que entre otras funciones median la actividad de los factores de crecimiento en la superficie de las celulas y en la matriz extracelular. En el trabajo de esta tesis doctoral nos planteamos los objetivos siguientes: - Caracterizamos la union de las isoformas de PDGF a las diferentes especies de glicosaminoglicanos utilizando los clones de celulas CHO que presentan diferencias en la expresion de glicosaminoglicanos y en las hASMC (celulas musculares lisas provenientes de arteria humana). - Estudiamos el efecto de las diferentes isoformas de PDGF en la mitogenesis y migracion en las hASMC. En este ultimo punto, estudiamos el efecto de las isoformas de PDGF en cuanto a la induccion de la migracion al azar (quimiocinesis) y la migracion dirigida (quimiotaxis) hacia los factores de crecimiento. - Analizar la importancia de la interaccion de las isoformas de PDGF con los glicosaminoglicanos en la activacion de la mitogenesis y migracion inducida por el PDGF en las hASMC. Con este fin, utilizamos la heparina como competidor soluble de la interaccion con los glicosaminoglicanos e inhibidores de la sulfatacion y de la sintesis de los glicosaminoglicanos. Los resultados de este trabajo nos permiten concluir que: - Las isoformas de PDGF de cadena larga (y principalmente el PDGF-A de cadena larga) que presentan la secuencia de union a glicosaminoglicanos presentan mayor afinidad de union a la membrana de las celulas CHO y hASMC. - Las isoformas de PDGF de cadena larga se unen a glicosaminoglicanos de tipo heparan sulfatos y a glicosaminoglicanos de tipo condroitin sulfatos. Las isoformas de PDGF de cadena corta se unen principalmente a heparan sulfatos. - El PDGF-B de cadena corta es la isoforma de PDGF que activa en mayor grado la mitogenesis, quimiotaxis y quimiocinesis en las hASMC. - La heparina y el clorato sodico (inhibidor de la sulfatacion de los glicosaminoglicanos) inhiben de forma parcial y dependiente de concentracion la mitogenesis de las hASMC activada por los factores del suero. La heparina tambien inhibe de forma parcial y dependiente de concentracion la quimiotaxis de las hASMC inducida por los factores del suero. - La heparina inhibe en mayor grado la quimiotaxis que la mitogenesis de las hASMC activada por el PDGF-B de cadena corta. - La mitogenesis de las hASMC activada por las isoformas de PDGF se inhibe principalmente por el clorato sodico y beta-xilosido (inhibidores de la sulfatacion y de las sintesis de glicosaminoglicanos respectivamente). En consecuencia, estos resultados sugieren que la secuencia codificada por el exon 6 de union a glicosaminoglicanos presenta importancia en la inmovilizacion y retencion de las isoformas de PDGF por parte de los glicosaminoglicanos de la superficie y de la matriz extracelular. Las isoformas de PDGF de cadena corta que no presentan la secuencia de union a glicosaminoglicanos presentan mayor efecto inductor de la proliferacion y migracion de las celulas musculares lisas.