Participación de G-CSF en la migración de neutrófilos de pez cebra en respuesta a un daño

Resumen

Los neutrofilos son un tipo celular esencial para el desarrollo de una respuesta inflamatoria. La correcta regulacion de la entrada de neutrofilos al sistema circulatorio es de gran importancia. Una neutropenia, o disminucion permanente de los niveles sanguineos de neutrofilos esta asociada a una mayor susceptibilidad a infecciones. Un aumento en los niveles sanguineos puede llevar a infiltracion de estos en los tejidos sanos, produciendo enfermedades inflamatorias. Se ha visto en mamiferos que el Factor Estimulador de Granulocitos, G-CSF, participa en la salida de los neutrofilos a la sangre, desde el sitio donde son retenidos, la medula osea. G-CSF actua disminuyendo los niveles de senales pro-retencion, como CXCL12 con su receptor CXCR4, y aumentando la senalizacion pro-migracion como son las citoquinas CXCL1, CXCL2 y CXCL8 con sus receptores CXCR1 y CXCR2. En pez cebra existen 2 paralogos para este gen, uno ubicado en el cromosoma 12 (gcsf-chr12), y otro ubicado en el cromosoma 19 (gcsf-chr19). Liongue et al. 2009 estudio gcsf-chr12 junto con su receptor y concluyeron que no participaba en la migracion de neutrofilos en respuesta a un dano en la aleta ventral, pero que si se observo un aumento en su expresion 8 horas despues de ser desafiado con LPS. En este trabajo, estudiamos la participacion de gcsf-chr 19 en la migracion de neutrofilos en respuesta a un dano. Realizamos tres tipos distintos de dano: dano cercano, distante y severo. Y solo en el dano severo observamos la llegada de neutrofilos al dano por la circulacion. Utilizamos este modelo de dano para analizar la expresion de gcsf-chr 19 y cxcl8, observamos un aumento de ambos 0.5 horas post dano (hpd) y un nivel maximo de expresion 1 hpd. Los niveles de gcsf-chr 19 disminuyeron a las 2 hpd y a las 3 hpd ya no se encontraron diferencias con los niveles basales. Los niveles de cxcl8 disminuyeron a las 2 hpd, pero a diferencia de g-csfchr 19 presenta un ligero aumento a las 3 hpd. Se diseno un morfolino contra gcsf-chr 19 para analizar el efecto de la falta de funcion de este gen en la migracion de neutrofilos. Se observo que en los controles sin inyectar, el porcentaje de neutrofilos en el sitio del dano aumento considerablemente al comparar 1 y 3 hpd. En cambio, en los peces morfantes, el porcentaje de neutrofilos 3 hpd es similar a 1 hpd. Al inhibir la formacion de peroxido de hidrogeno (senal pro-migratoria antes de 1 hpd) con el compuesto DPI se observa una disminucion en el porcentaje de neutrofilos en el sitio del dano en embriones morfantes y controles a 1 hpd. En embriones controles este porcentaje aumenta a las 3 hpd, en cambio en morfantes se mantiene.