Adhesión celular al dominio de unión a heparina III de la fibronectina. Implicación en reorganización del citoesqueleto y migración celular

Resumen

La fibronectina (FN) es una glicoproteina de la matriz extracelular (MEC) capaz de mediar adhesion celular, destacando el dominio central de union a celulas con la secuencia RGD, ligando de las integrinas alfa5beta1 y alfavbeta3. La FN contiene ademas tres dominios de union a heparina denominados I, II y III. En esta Tesis Doctoral se han estudiado con detalle las propiedades bioquimicas y biologicas del dominio de union a heparina III (Hep III) de la FN. Se han identificado dos nuevas secuencias mediadoras de adhesion dentro de este dominio (concretamente en la repeticion III5 de la FN), denominadas H2 y HBP/III5. El sitio H2 es capaz de mediar adhesion de diferentes celulas linfoides B y T, asi como de melanoma, a traves de las integrinas alfa4beta1 y alfa4beta7 en estado activado (con Mn2+ o con el anticuerpo monoclonal anti-beta1 TS2/16), pero no en el basal. El sitio HBP/III5 media tambien adhesion celular, pero a traves de proteoglicanos de tipo condroitin-sulfato (PGS). Ambos sitios son activos en el contexto del fragmento recombinante FN-III4-5, correspondiente al dominio Hep III de la FN. La adhesion al framgento FN-III4-5 implica la cooperacion de ambos receptores (integrina alfa4 y PGCS) aunque la contribucion de cada uno de ellos depende del metodo de activacion de la integrina alfa4 empleado (Mn2+, o TS2/19). Ademas, este fragmento une heparina con alta avidez, equiparable a la del dominio de alta afinidad Hep II. Tambien se ha estudiado la posible implicacion del dominio Hep III de la FN en la reorganizacion de citoesqueleto y regulacion de adhesiones focales inducidas por adhesion a traves de alfa5beta1, ya que podria jugar un papel similar al descrito para el dominio Hep II. Para ello, se utilizaron celulas de melanoma SKMEL-178 que expresan las integrinas alfa4beta1, alfa5beta1, asi como PGCS, y porque los linfocitos no son capaces de reorganizar el citoesqueleto. La presencia del fragmen