Estudio de migración de neuronas Pax6+ en el tálamo del pollo y del ratón

Resumen

ESTUDIO DE MIGRACION DE NEURONAS PAX6+ EN EL TALAMO DEL POLLO Y DEL RATON OBJETIVO GENERAL El objetivo general de esta tesis es la caracterizacion de la migracion protagonizada por un conjunto de neuronas Pax6+ en el talamo del pollo y del raton y su analisis comparativo. MATERIALES Y METODOS Se utilizaron embriones de pollo (HH28 - HH38) para analizar mediante tecnicas de inmunohistoquimica y de hibridacion in situ con sondas de mRNA del gen Pax6 en secciones de vibratomo. Tambien se llevaron a cabo marcajes mediante BDA y posterior cultivo organotipico. Las preparaciones fueron escaneadas y analizadas. Las imagenes de secciones de cerebros de raton procesadas mediante hibridacion in situ para el gen Pax6 de estadios embrionarios y postnatales fueron obtenidas del atlas de desarrollo del raton (Allen Brain Atlas). RESULTADOS Y CONCLUSIONES Las observaciones obtenidas confirman la existencia de una migracion neuronal tardia que se origina en la region retrohabenular, en el techo posterior del prosomero 2. Las celulas migratorias Pax6+ comienzan a visualizarse claramente en la region retrohabenular en el estadio HH31, terminando la migracion aparentemente en HH37. Se desplazan desde su origen laterorrostralmente en la zona fronteriza entre la region habenular y el talamo propiamente dicho. En el caso del pollo, este avance es mas marcado y alcanza, a traves del nucleo superficial microcelular, regiones cercanas a la frontera intertalamica, incorporandose escasas celulas de esta migracion a la region habenular lateral. En raton, en cambio, la migracion penetra mas importantemente en la region habenular lateral donde acaba integrandose en el subnucleo parvocelular de la division lateral del nucleo habenular lateral y a penas se observan otras celulas fuera de esa zona habenular. En el pollo se observa un segundo origen celular Pax6+ a continuacion del area retrohabenular, ya en la zona pretectal precomisural. Desde este origen existe una pequena migracion que alcanza aparentemente las inmediaciones del nucleo parvocelular de la comisura posterior. El resultado de los marcajes con BDA in vitro en el estadio HH31, de produccion inicial de estas celulas, corroboro la existencia de un movimiento migratorio desde este origen en la region retrohabenular hacia la zona de destino descrita mediante hibridacion in situ de Pax6, tanto en el caso de la migracion talamica como la pretectal. Desde el punto de vista de la anatomia comparada, se concluye que los fenomenos retrohabenulares migratorios observados en el pollo y en el raton coinciden en su cronologia embriologica, ya que aparecen en estadios comparables y en ambos casos figura como diana la region habenular lateral. Si bien en el pollo aparecen celulas que parecen invadir zonas no habenulares cercanas cabe preguntarse si no cabria incluir dichas regiones en la zona habenular. En el caso del raton las celulas migradas componen una subpoblacion menor del area habenular lateral que forma el subnucleo parvocelular de la division lateral del nucleo habenular lateral. STUDY OF THE MIGRATION OF PAX6+ NEURONS IN THE CHICK AND MOUSE THALAMUS GENERAL AIM The overall objective of this thesis is to characterize the migration of a population of Pax6+ neurons in the chick and mouse thalamus and its comparative analysis. METHODS Chick embryos (HH28 - HH38) were used to analyze by immunohistochemistry and in situ hybridization with Pax6 mRNA probes in vibratome sections. Labelling with BDA were also carried out and subsequent organotypic culture. The preparations were scanned and analyzed. The images of mouse brain sections processed by in situ hybridization for the Pax6 gene in embryonic and postnatal stages were obtained from the atlas of mouse development (Allen Brain Atlas). RESULTS AND CONCLUSIONS The observations confirm the existence of a late neuronal migration originated in the retrohabenular region, in the posterior roof of prosomere 2. Migratory Pax6+ cells become clearly visible in the retrohabenular region at HH31, finishing the migration apparently at HH37. They progress from their origin latero-rostrally through the habenular-thalamic border. This advance is more pronounced in the chick, reaching through the superficial microcellular nucleus regions near the intrathalamic border, joining few of these migrating cells the lateral habenular region. In contrast, the migration in mouse penetrates mainly in the lateral habenular region where it integrates the parvocellular subnucleus of the lateral division of the lateral habenular nucleus and scarce cells are found out of the habenular region. A second Pax6+ cellular origin is found in chick, adjacent to the retrohabenular area, in the precommisural pretectal region. From this origin a small migration takes place apparently to the surroundings of the parvocellular nucleus of the posterior commisure. The results of the in vitro BDA labelling at HH31, initial production stage of these cells, confirmed the existence of a migratory movement from this origin in the retrohabenular region to the target area described by Pax6 in situ hybridization, for both thalamic and pretectal migrations. From a comparative anatomical point of view, the retrohabenular migratory phenomena observed in chick and mouse concur in their embryological chronology, since they appear at comparable stages and the target is the lateral habenular region in both cases. While in chick there appear cells invading nearby non habenular regions, one might wonder whether these regions should be included in the habenular zone. In the case of mouse, the migrated cells shape a minor subpopulation of the lateral habenular area that forms the parvocellular part of the lateral division of the lateral habenular nucleus.